Biology 版 (精华区)
发信人: zhili (北侠), 信区: Biology
标 题: 分子生物学新技术
发信站: 哈工大紫丁香 (Sun Nov 23 01:53:50 1997), 转信
From: cynthia.bbs@bbs.sjtu.edu.cn (tt)
Date: 06 Nov 1997 01:22:34 GMT
===============================================================================
发信人: lihz (里海舰队), 信区: GlobalMed
标 题: 分子生物学新技术
发信站: 杏林站 (Thu Jun 5 21:15:52 1997)
随着分子生物学的发展，近几年出现了许多用于遗传差异分
析的DNA指纹技术。包括RFLP (Random Amplified Polymorphism，
限制性片段长度多态性)，该技术基本原理是物种的基因组DNA
在限制性内切酶作用下，产生相当多的大小不等的片段，用放射
性同位素标记的DNA作探针，把与被标记的DNA相关的片段检
测出来，从而构建出多态性图谱；RAPD(Random Amplified
Polymorphism DNA，随机扩增的多态性DNA)，其是利用随机的
脱氧核苷酸序列为引物，对所研究的总DNA进行PCR扩增，扩
增产物经琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺电泳分离，经染色或放射自显
影来检测扩增产物DNA片段的多态性，这些扩增的DNA片段的
多态性便反应了总基因组相应区域的DNA多态性；AFLP
(Amplified Restricrion Fragment Polymorphism，扩增酶切片段
多态性)，其基本原理是对基因组DNA限制性酶切片段的选择性
扩增，使用双链人工接头与基因DNA的酶切片段相连接作为扩
增反应的模板，接头与接头相邻的酶切片段的几个碱基序列作为
引物的结合位点，从而产生大量的不同AFLP的指纹[尹佟明，
1997]。这些技术在品种鉴别，目的基因定位及遗传图谱构建中得
到了广泛的应用，对植物基因组研究产生了深刻的影响。
这些技术首先要求有一个稳定地获取基因组DNA或线粒�
增产物经琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺电泳分离，经染色或放射自显
影来检测扩增产物DNA片段的多态性，这些扩增的DNA片段的
多态性便反应了总基因组相应区域的DNA多态性；AFLP
(Amplified Restricrion Fragment Polymorphism，扩增酶切片段
多态性)，其基本原理是对基因组DNA限制性酶切片段的选择性
扩增，使用双链人工接头与基因DNA的酶切片段相连接作为扩
增反应的模板，接头与接头相邻的酶切片段的几个碱基序列作为
引物的结合位点，从而产生大量的不同AFLP的指纹[尹佟明，
1997]。这些技术在品种鉴别，目的基因定位及遗传图谱构建中得
到了广泛的应用，对植物基因组研究产生了深刻的影响。
DNA的方法，由于植物组织细胞的复杂性，给提取DNA带来了�
很大的障碍，目前的许多方案都采取液氮冰冻研磨，以及一些长
时间的高温水浴，这些操作要求的设备复杂，条件严格，需要时
间较长，同时，由于提取过程中的操作条件很剧烈，DNA很容
易断成小分子片段，难以获得良好的结果。这里探讨使用的方法
采用了温和的实验条件，在最少的步骤里完成了去细胞碎片，抽
提蛋白等，最后利用绕出DNA的办法，获得较长的DNA样品，
可用于遗传差异分析。
--
※ 来源:·杏林站 bbs.gzsums.edu.cn·[FROM: 202.113.16.181]
--
※ 来源:·饮水思源站 bbs.sjtu.edu.cn·[FROM: 202.120.26.50]
--
☆ 来源:．哈工大紫丁香 bbs.hit.edu.cn．[FROM: bbs@bbs.hit.edu.cn]
Powered by KBS BBS 2.0 (http://dev.kcn.cn)
页面执行时间：3.936毫秒