Biology 版 (精华区)

发信人: Ingrid (新世纪的灵儿), 信区: Biology
标  题: 基因的新功能及新基因的发现(8)
发信站: 紫 丁 香 (Mon Jan  3 21:13:20 2000), 转信



发信人: zel (雨), 信区: biology
标  题: 基因的新功能及新基因的发现(8)
发信站: 饮水思源站 (Wed Dec 29 22:54:15 1999), 转信

2、工作基础
(1)研究基础
参与本领域Part B部分工作的同志们，在原来和进行中的研
究课题中，均已有了国际水平的研究成果和长期的研究积累
(见七项中附表)。
A.寻找结瘤调控新因子
a.我们选取R. leguminosarum bv. viciae的结瘤基因作为研
究对象。在这种根瘤菌里nodD只有一个拷贝，却具有激活和
自身负反馈两种能力，对它的研究有助于我们同时了解正、
负两方面的调控。洪国藩组自1987年在国际上率先证明NodD
是DNA结合蛋白(Hong et al, 1987)以来,在结瘤基因调控方
面又作了许多工作，取得了进展。
b.在对NodD的研究中，NodD的大量纯化尚是国际性难题，在
E.coli中高效表达的NodD或者没有激活功能或者连DNA结合
能力也丧失殆尽。我们已用DNA亲和层析法自根瘤菌部分纯
化了NodD，满足了随后实验对纯度的要求。也构建了高效
表达NodD的E. coli工程菌，期望能改进条件得到有较高活
性的NodD。
发现NodD与DNA的结合在较高浓度的类黄酮存在下被解离。
使用足迹法确定了NodD在nodA-D基因间区和nodF启动子区的
结合顺序。它们都可以分为两部分，与R.meliloti 的情况
相比有保守性。
NodD的结合在nodA-D基因间区和nodF启动子区造成轻微的弯
折(20° 左右)，R. meliloti中的弯折角度要大些(至少36° )。
c.顺式元件的研究 羟胺随机突变结合报道基因转录活性分析
发现影响nodD基因表达的核苷酸集中在上游两个旋转对称区，
据此提出了NodD自身负反馈的环出模型(Mao et al.1994)。
自nodA方向和nodD方向各产生了一套系统缺失，证明NodD的自
身负反馈需要与nod box 的结合，并在nodA-D间区分出若干功
能亚区，部分结果还提示存在新的调控因子。
d. RNA聚合酶的研究 纯化了根瘤菌的RNA聚合酶，建立了体外
转录系统。含nodA-D基因间区的DNA片段在体外转录中可以得到
nodD方向的特异产物，此产物的量受NodD的抑制。
分析了RNA 聚合酶在nodA-D间区的结合顺序；发现这种富含s
70同源亚基的制剂在nodF启动子区没有显著的保护。
e. 寻找调控结瘤基因表达的新因子 1987年我们即观察到根瘤
菌中存在另外的与nodA-D基因间片段和nodF启动子结合的蛋白，
最近对此成分(称作Px)作了进一步研究。发现它可以与NodD分离
开。部分纯化的蛋白保持DNA结合活性，并且在nodA-D基因间片
段和nodF启动子上能造成强烈弯折(77° 和44° )。它在nodA-D
间区有一个保护位点，在nodF启动子区有两个保护位点，其保护
区与NodD和RNA聚合酶的保护区有明显差异，而且自身之间缺乏
保守性。
Western分析发现R.leguminosarum中GroEL能和NodD共纯化，但二
者并非总联系在一起。
f.技术改进 提出了“足迹测序”的方法，凝胶内蛋白-DNA结合的
方法，改进“G+A”化学测序方法，发展了一种基于生物素-亲和素
系统确定DNA结合蛋白种类和分子量的方法。
B.抗棉花黄萎病基因等
a. 已从抗黄萎病棉花中分离到抗黄萎病菌的功能蛋白质。
b. 已从大穗小麦中通过RAPD技术，获得一特异DNA片段，并在多株
不同的大穗(密穗)小麦中验证该DNA片段有存在，已进行了测序分析。
c. 已得到慈菇蛋白酶抑制剂基因5'－上游约300bp的顺序。
d. 在花粉管道操纵技术转基因研究方面有良好的基础。

(2) 设备条件
已基本具备了展开研究所需的实验材料，掌握了研究技术，具备了
研究体系。
已基本具备了展开研究所需的仪器、设备，如高速冷冻离心机，台
式冷冻离心机，层析系统，各种电泳系统，微生物培养摇床，PCR
仪、杂交炉等，但有些常规仪器已老化，需更新。
另需要时可借用本所及分子生物学国家重点实验室的公用或大型
仪器，如超速冷冻离心机，高压液相色普仪，分光光度计等。

(3) 经费来源
"八五”期间获“863”计划和“攀登”计划相关项目的支持;
“九五”期间主要依靠“攀登”计划项目的支持; 1995-1997年
国家重点科技攻关项目；1995-1997年中国科学院重点项目；19
95-1997年上海市农委科技攻关项目; 1995-1998年上海市自然科
学基金项目。现有科研经费100余万元。

3、科研队伍结构与人才培养
本部分现有研究员2人，副研究员1人，高级实验师3人，助理研究
员2人， 博士后1人，其他科技人员7人。
随着今后老专家的退休及年青科研人员的出国深造，需要不断调整
补充，重视对科研人才的培养，尽可能的培养硕士和博士研究生，
毕业后争取他们留组内工作。培养初级研究人员尽培养快晋升为中
级人员。让中级研究人员在组内担负研究重任，尽快成为高级研究
人才。使他们成为跨世纪学科带头人，达到本课题组新老研究人员
更替，使科研工作后继有人。争取形成一支主要研究骨干相对稳定
、由老中青科技人员组成的科研队伍。同时，要与在国外的科研人
员( 特别是博士后等 )保持联系，争取他们以多种方式为所或回所
工作，加强我们的研究力量。

4、学术交流与国际合作
与英国John Innes 研究所自1987年起就保持着良好的合作关系，
双方在研究材料、人员等方面都有实质性交流合作，并已在国内外
学术期刊上联合发表了多篇研究论文，主要有Hong等, NAR, 1987；
Mao等Gene, 1994等。在1996年澳大利亚固氮会议期间，洪国藩教授
与A. Downie教授充分肯定了前阶段双方的合作成果，对进一步广泛
合作达成了共识，双方计划加强结瘤基因调控机理的合作研究。该
组与法国 Toulouse 的CNRS-INRA 的植物与微生物相互关系的分子
遗传学研究实验室也建有密切合作关系，双方学术带头人曾多次互
访，1993年生化所倪福弟在法国该实验室高效表达、纯化了固氮调
控蛋白FixK，并进行了功能研究，结果导致一个新的固氮基因调控
蛋白( FixT)的发现( Foussard等，Mol. Microbiology, 1997)。结
合在结瘤基因方面的新发现，双方决定在共生固氮调控新基因的寻
找方面加强合作。
在国内与江苏省农科院和上海市农科院已有多年的合作，在棉花、
蔬菜的抗病、虫害分子育种中取得一定的成果，并重视所内研究组
之间的合作研究(与刘望夷组合作研究樟树种子RIP基因)。与台湾省
中央研究院植物研究所正进行讨论研究分子育种计划，准备合作三
年。争取与澳大利亚Cooperative Research Centre of Plant Scie
nce 合作研究改变基因表达控制植物生长发育。
重视国内外新科技发展动态，每月组织学术报告和科研工作汇报
交流，对新的研究动向或趋势，积极鼓励整理综述或翻译发表文
章。在经费许可情况下，积极让组内研究人员争取参加国内和国
际的学术讨论会。

5、承担任务情况(1991~ 1997年)
承担的研究项目包括国家自然科学基金项目、八六三计划项目、
中国科学院重大与重点项目、国家攀登计划项目等研究课题(详
见统计表)。
6、附表
表1. 1990~ 1996年本领域论文发表统计
领 域
 国际刊物
 国内刊物
 国际学术会议
 全国学术会议
 专 著

基因的新功能及新基因的发现
 44
 119
 7
 25
 4


表2. 1990－1996年本领域成果统计
重大成果
 上海市
 部委及其
 成 果
 获直接

国家级
 中科院
   它省市
 转 让
 经济效益

3
 1
 2
 2
 2
 2

表3. 1990年~ 1996年本领域获奖成果情况
成果名称
 成果登记号
 主要完成人
 获奖类别及等级

乙型肝炎病毒基因的克隆与表达
   李载平
 90年获国家自然科学二等奖

高温DNA顺序测定系统的创立
 153831911171
 洪国藩
 93年获国家科技进步二等奖

人表皮生长因子基因工程实验室研究
 153831931201
 李载平
 95年获上海市科技进步二等奖

NF－IL6mRNA的3’非翻译区的肿瘤抑制功能
 153831951001
 刘定干

家蚕个体表达系统
 153831951006
 吴祥甫

表4. 1991年~ 1997年7月本领域承担课题情况

序号
 项 目 名 称
 课题来源
 经费
 起止时间
 负责人

1
 乙型肝炎病毒变异株研究
 国家基金委
 6
 9301-9512
 甘人宝

2
 人乙型肝炎病毒基因产物和真核细胞蛋白因子
 国家基金委
 6
 9301-9512
 俞贤明
 相互作用





3
 外源DNA(基因)通过苗端基于分生组织细胞转
 国家基金委
 6
 9401-9612
 周光宇

 化植株理论





4
 调控蓖麻蚕rRNA基因复制与转录的染色板模板
 国家基金委
 9
 9601-9812
 赵慕钧

5
 利用细胞遗传工程培育抗病水稻的研究(合作)
 国家基金委
 0.8

 龚蓁蓁

6
 人表皮生长因子中试研究
 国家科委
 30
 9101-9412
 李载平

7
 共生固氮体系中最佳结瘤固氮控制模型的研
 国家科委
 178.8
 9101-9512
 洪国藩

 究(攀登主持)





8
 人抗癌基因研究
 国家科委
 50
 9101-9512
 刘定干

9
 根瘤菌和植物寄主相互关系的分子遗传研究
 国家科委
 40
 9101-9512
 倪福弟

10
 阻断乙肝病毒复制的新技术(合作)
 国家科委
 12.56
 9101-9512
 吴祥甫

11
 家蚕个体表达系统(合作)
 国家科委
 48
 9101-9612
 吴祥甫

12
 红细胞生成素基因工程(合作)
 国家科委
 26.5
 9201-9512
 吴祥甫

13
 羊个体表达系统(合作)
 国家科委
 8
 9201-9612
 吴祥甫

14
 抗虫棉及其杂种优势利用(合作)
 国家科委
 3
 9506-9706
 龚蓁蓁

15
 重组降钙素的研究
 国家科委
 50
 9601-2000
 陈珍珍

16
 重组人表皮生长因子
 国家科委
 200
 9601-2000
 甘人宝

17
 家畜抗日本血吸虫(中国大陆株)多价抗原基
 国家科委
 30
 9601-2000
 吴祥甫

 因工程疫苗





18
 多价外源基因及偶联表达得重组昆虫病毒表
 国家科委
 100
 9601-2000
 杨冠珍

 达系统





19
 抗癌基因表达元件
 国家科委
 65
 9601-200012
 刘定干

20
 转API基因抗虫棉的分子研究(合作)
 国家科委
 3
 9601-9812
 龚蓁蓁

21
 花卉分子育种
 上海市农委
 10
 9701-9912
 周光宇

22
 抗虫基因在夏淡菜中的导入及转基因植株
 市农科院
 4.5
 9506-9805
 龚蓁蓁

 的再生





23
 乙肝病毒(HNV)3.5kbRNAs转录调控机理
 市择优
 2
 9412-9512
 赵新泰

 的研究





24
 新的癌基因和抗癌基因及其相关调控基因
 市自然基金
 10
 9510-9710
 刘定干

25
 留学择优
 院教育局
 1
 9201-9312
 陶全洲

26
 AP2烟草研究(合作)
 云南农科院
 0.5
 9501-9512
 龚蓁蓁

27
 真核基因表达调控机制研究(合作)
 中科院
 10
 9401-9612
 吴 雪 雪

28
 鲑鱼降钙素基因工程研究
 中科院
 6
 9701-9912
 李载平

29
 慈菇蛋白酶抑制剂基因及中间载体
 中科院重大
 12
 9101-9512
 龚蓁蓁

30
 主要农作物新品种选育技术
 中科院重大
 14.5
 9101-9512
 周光宇

(续上表)
31
 GM-CSF
 中科院重大
 50
 9701-2000
 甘人宝

32
 鲑鱼降钙素
 中科院重大
 25
 9701-2000
 甘人宝

33
 ES细胞和老年性痴呆基因
 中科院重大
 20
 9701-2000
 李载平

34
 EGF
 中科院重大
 15
 9701-2000
 李载平

35
 植物分子育种小麦优良品系
 中科院重点
 7
 9501-9612
 龚蓁蓁

36
 植物分子育种小麦优良品系有用基因的
 中科院重点
 3
 9501-9712
 龚蓁蓁

 定位(合作)





项目总经费(万元)
 1053.16




表5. 1997年7月本领域在研课题情况表

序号
 项 目 名 称
 课题来源
 经费
 起止时间
 负责人

1
 调控蓖麻蚕rRNA基因复制与转录的染
 国家基金委
 9
 9601-9812
 赵慕钧

 色板模板





2
 重组降钙素的研究
 国家科委
 50
 9601-2000
 陈珍珍

3
 重组人表皮生长因子
 国家科委
 200
 9601-2000
 甘人宝

4
 家畜抗日本血吸虫(中国大陆株)多基
 国家科委
 30
 9601-2000
 吴祥甫

 价抗原因工程疫苗





5
 多价外源基因及偶联表达得重组昆表
 国家科委
 100
 9601-2000
 杨冠珍

 虫病毒达系统





6
 抗癌基因表达元件
 国家科委
 65
 9601-2000
 刘定干

7
 转API基因抗虫棉的分子研究(合作)
 国家科委
 3
 9601-9812
 龚蓁蓁

8
 花卉分子育种
 上海市农委
 10
 9701-9912
 周光宇

9
 抗虫基因在夏淡菜中的导入及转基
 市农科院
 4.5
 9506-9805
 龚蓁蓁

 因植株的再生





10
 新的癌基因和抗癌基因及其相关调
 市自然基金
 10
 9510-9710
 刘定干

 控基因





11
 鲑鱼降钙素基因工程研究
 中科院重大
 6
 9701-9912
 李载平

12
 GM-CSF
 中科院重大
 50
 9701-2000
 甘人宝

13
 鲑鱼降钙素
 中科院重大
 25
 9701-2000
 甘人宝

14
 ES细胞和老年性痴呆基因
 中科院重大
 20
 9701-2000
 李载平

15
 EGF
 中科院重大
 15
 9701-2000
 李载平

16
 植物分子育种小麦优良品系有用
 中科院重点
 3
 9501-9712
 龚蓁蓁

 基因的定位(合作)





项目总经费(万元)
 600.50



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